表达猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白的重组腺病毒的构建及其免疫原性分析

【目的】 利用腺病毒AdMax系统表达载体表达猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）核衣壳蛋白（nucleocapsid protein）,并研究其免疫原性。【方法】 参考GenBank中已公布的PRRSV N基因序列（登录号：KT945017.1）,人工合成PRRSV N基因,并将其连接至腺病毒穿梭载体pDC316-mCMV-EGFP,转化大肠杆菌Top10感受态细胞,构建重组穿梭质粒pDC316-N。将重组穿梭质粒pDC316-N与AdMax腺病毒系统的骨架质粒PBHGLOX （delta） E1,3Cre共同转染293A细胞,获得重组腺病毒rAd-N,对获得的重组腺病毒液进行PCR和测序鉴定,用鉴定正确的rAd-N病毒液感染293A细胞,对该重组腺病毒进行扩大培养,检测病毒的TCID₅₀,并用RT-PCR和Western blotting检测重组腺病毒的表达和反应原性。用重组腺病毒免疫小鼠,收集血清用PRRSV抗体检测试剂盒检测其抗体水平,初步评价其对小鼠的免疫效果。【结果】 PCR扩增出1条大小为400 bp的PRRSV N基因条带,测序结果正确,表明重组腺病毒构建成功,浓缩后测得其半数组织培养感染剂量（TCID₅₀）为10^-10.239。RT-PCR和Western blotting检测结果证实目的基因在基因和蛋白水平上均可得到正确表达,蛋白分子质量约为14 ku。小鼠特异性抗体检测表明,重组腺病毒rAd-N免疫小鼠后可使小鼠快速产生PRRSV特异性抗体,与对照组差异显著（P<0.05）,其中重组腺病毒与Gel佐剂配合使用时效果最好,最高可达7.84 U/L。【结论】 本研究成功构建表达PRRSV N蛋白的重组腺病毒,其具有良好的免疫原性,为建立针对PRRSV抗体的间接ELISA检测方法和进一步研发PRRSV抗体检测试剂盒奠定基础。     

饲喂频率对妊娠母猪背膘厚和繁殖性能的影响

[目的] 研究饲喂频率对妊娠母猪背膘厚和繁殖性能的影响。[方法] 挑选加系杜洛克经产母猪480头,配种时按照胎次（2~7胎）、背膘厚（11~22 mm）相近的原则随机将母猪分为T1组（每天饲喂1次）和T2组（每天饲喂2次）,两组每天等量饲喂。T1组母猪220头,饲喂时间为8：00;T2组母猪260头,饲喂时间为8：00和15：00,每次饲喂量为总量的一半,定位栏饲养。[结果] ①饲喂频率不影响妊娠56 d、开配-妊娠56 d的背膘厚（妊娠56 d背膘厚-开配背膘厚）（P>0.05）;T2组妊娠110 d（P=0.06）、妊娠56-110 d（P=0.09）背膘厚（妊娠110 d背膘厚-妊娠56 d背膘厚）有高于T1组的趋势。②饲喂频率对窝产总仔数、活仔数、死胎数、木乃伊胎数、初生窝重以及初生个体重均无显著（P>0.05）影响。③在三胎母猪中,T2组妊娠110 d（P=0.01）、妊娠56-110 d（P=0.04）背膘厚均显著高于T1组;五胎及以上母猪,T2组妊娠56-110 d（P=0.08）背膘厚有高于T1组的趋势。④饲喂频率不影响二胎母猪窝产总仔数、死胎数、木乃伊胎数、初生窝重以及初生个体重（P>0.05）,但二胎母猪中T2组活仔数有高于T1组的趋势（P=0.07）。[结论] 饲喂频率由每天两餐减少到每天一餐不会对母猪的繁殖性能产生不利影响。     

Variation for reproductive and agronomic traits among T. repens × T. nigrescens third generation backcross hybrids in the field

Interspecific hybridisation with Trifolium nigrescens Viv. is a possible strategy to improve the reproductive potential of white clover (Trifolium repens L.). Following the development of a fertile F1 hybrid, three generations of backcrossing have been carried out usingT. repens as the recurrent parent. Vegetative characteristics, stolon growth and seed yield components of the backcross (BC) 2 and 3 generations, as well as the parental species were measured on spaced plants grown in the field. Leaf size and plant spread of the BC2 and BC3 generations were less than T. repens but there was no difference in plant fresh weight. Numbers of inflorescences per plant and florets per inflorescence of the backcrosses were greater than T. repens however this was not reflected indifferences in seed yield per plant asT. repens had more seeds per floret and per plant than the backcrosses. Differences in stolon length, the proportion of flowering nodes and the pattern of axillary bud development were observed between T. repens and the backcrosses. Significant variation among the BC 3 generation for vegetative and reproductive traits was observed. Individual plants among the BC 3 generation were identified that combine high forage yield, substantial inflorescence production and good fertility, and these will form the basis of further selection. This revised version was published online in August 2006 with corrections to the Cover Date.     

一种从藤粉蝶分离的微孢子虫的生物学特性和分子系统发育研究

从广州市萝岗桑园周边捕捉到的野外昆虫藤粉蝶(Delias pasithoe)成虫体内分离到1株微孢子虫,经人工接种可在家蚕体内全身性寄生。用透射电子显微镜观察到该微孢子虫为双核,极丝11～12圈,极丝同型,基本符合Nosema属微孢子虫超微结构特征。该微孢子虫在其生活史发育过程中以偶倍数核为主,以二分裂方式增殖,形成双核孢子,发育周期为108 h。基于SSU rRNA和rRNA ITS序列的相似性比较和系统进化分析进一步证实该微孢子虫与Nosema属亲缘关系最近,应被分类为Nosema属‘true’Nosema亚群。     

Caspase-9在肉用绵羊主要生殖器官中的分布研究

通过试验研究凋亡因子Caspase-9在肉用绵羊主要生殖器官中的表达,并探讨其生理意义.利用免疫组织化学的方法对Caspase-9在肉用绵羊主要生殖器官中的表达进行研究.研究结果显示,Caspase-9只在细胞质中表达,其在卵巢中主要分布于原始卵泡、初级卵泡及颗粒性黄体细胞,而卵泡膜性黄体细胞中未见表达;黄体期,主要表达于子宫的浅层腺体腺上皮细胞、子宫内膜上皮细胞、子宫颈黏膜固有层的淋巴小结、输卵管黏膜上皮分泌细胞和纤毛细胞、峡部的浆液性腺的腺上皮细胞;卵泡期,子宫和输卵管各个部位阳性反应不明显.在正常生理情况下,Caspase-9参与了肉用绵羊主要生殖器官周期性变化的调控和子宫黏膜免疫,对生殖器官功能的稳定发挥起着重要作用.     

妊娠后期日粮中添加不同水平N-氨甲酰谷氨酸对母猪繁殖性能的影响

本试验研究了日粮中添加不同水平N-氨甲酰谷氨酸(N-carbamylglutamate,NCG)对妊娠后期母猪繁殖性能的影响,并对其作用机理进行初步探讨.选用妊娠80 d的长大母猪32头,随机分成4组(对照组和试验组1、2、3),每组8个重复.对照组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮中分别添加0.04％、0.08％、0.12％ NCG.母猪妊娠第110天采血分离血浆用于测定血浆游离氨基酸、NO、NOS、激素含量和血液生化指标.结果表明,母猪妊娠后期日粮中添加0.08％NCG比空白对照组窝产活仔数提高11.75％(10.75 vs.9.62,0.05＜P＜0.1),窝产活仔总质量提高13.23％(16.52 kg vs.14.59 kg,P＜0.05),窝产死胎数降低57.14％(0.75 vs.1.75,P＜0.05),降低了血浆尿素氮含量(P＜0.05),同时提高了血浆精氨酸、NO、生长激素、锌离子浓度(P＜0.05).日粮中添加0.04％和0.12％ NCG也改善了母猪部分繁殖性能.上述结果表明,母猪妊娠后期日粮中添加NCG提高了母猪的繁殖性能,其作用机制可能是NCG有效提高了母猪内源精氨酸的合成,改善了母猪子宫内环境和胎猪营养供给,保证了胎猪的存活和生长.     

MicroRNA及其对哺乳动物繁殖的影响

卵巢功能的正常维持有赖于卵巢生殖细胞和体细胞之间的相互作用及若干卵巢自分泌和旁分泌的调节.这些调节物质调控卵巢内不同的细胞活动,包括细胞生长、分化和凋亡,从而对卵泡的发育起着至关重要的作用.Micro-RNAs(miRNAs)是一种小的、非编码、21～25 nt长的单链小分子RNA,近年来科学家们发现其在基因表达转录后水平的调控发挥了重要作用.鼠上的研究显示,miRNAs在卵母细胞成熟和卵巢卵泡发育过程中有调控功能.人上的研究也表明,miRNAs影响颗粒细胞中特定的基因表达,并参与卵巢癌的形成和发展.本文将对miRNAs的生物合成,及其在哺乳动物繁殖系统中的表达,正常和病理情况下miRNAs在繁殖系统中可能的调控作用作一综述.     

NPY、TSH-β、CaBP-28K基因在鸭繁殖期组织中的表达水平分析

本研究对繁殖期高邮鸭神经肽Y(NPY)、促甲状腺激素β(TSH-β)、钙结合蛋白-D28K(CaBP-28K)基因在中枢神经组织和周围组织表达量进行了实时荧光定量分析。结果表明:NPY基因在下丘脑中表达量显著高于在垂体和在小肠中的表达量(P<0.05),在卵巢、心脏、肝脏、脾脏、肾脏、胰腺、子宫、胸肌、腿肌等9个部位呈痕量表达;TSH-β基因在垂体、小肠中表达量较高,显著高于其他组织(P<0.05);CaBP-28K基因在小肠表达量最多,其次是卵巢和肾脏,但均显著大于垂体中表达量(P<0.05),在其他测定部位呈痕量表达,就生殖轴而言,CaBP-28KmRNA的表达量表现为卵巢>垂体>下丘脑。本研究为了解高邮鸭繁殖期相关基因的表达特征和内分泌机制,指导高邮鸭选种选育提供了理论依据。     

松嫩平原扁秆藨草种群生殖株构件表型可塑性及生长分析

采用大样本取样野外实地测定方法,对松嫩平原扁秆藨草(Scirpus planiculmis)种群生殖株的数量性状和生殖分配规律进行了分析。结果表明,在籽实成熟期,扁秆藨草种群生殖株各数量性状具有较大的表型可塑性。变异系数以种子生物量最大,为81.63%;其次为种子生殖分配73.14%;株高最小,为13.11%。扁秆藨草种群生殖株表型可塑性遵循着规律性,即随着株高和株生物量的增加,茎叶生物量呈幂函数增加,花序生物量呈直线增加;生殖分配随着株高和株生物量的增加呈幂函数或指数减少。     

十字花科蔬菜对蛞蝓生长发育的影响

在25℃、开灯1 h,关灯23 h(光照1L:23 D)、湿度20%~30%条件下,采用甘蓝、油菜、花椰菜、大白菜、小白菜饲养蛞蝓,研究蛞蝓的生物活性。结果表明:大白菜上蛞蝓的产卵前期、产卵量与其它4种蔬菜相比差异显著;用甘蓝饲养的蛞蝓平均每天增重量最大,为4.68 g,甘蓝上蛞蝓的种群趋势指数和平均体重增加值与其它4种蔬菜相比差异显著,小白菜和花椰菜上蛞蝓的种群趋势指数与油菜和大白菜相比差异显著。说明不同蔬菜对蛞蝓种群生命力的影响存在差异。